人ELISA檢測試劑盒的檢測目的是用于測定血清,血漿及相關液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等標本。
實驗原理:
人ELISA檢測試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中待測物質水平。用純化的待測物質抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入待測物質,再與HRP標記的待測物質抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測物質呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中待測物質濃度。
人ELISA檢測試劑盒的計算:
以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。
兔ELISA試劑盒液體類標本: 包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。
1、血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
2、血漿:應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
3、尿液:用無菌管收集。離心20分鐘左右。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4、細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并 放出細胞內成份。離心20分鐘左右。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
5、組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。