血清elisa試劑盒是基于經典的雙抗夾心ELISA方法,利用HRP偶聯的抗體,催化TMB產生顏色物質,基于標準曲線,計算出樣品中人抵抗素的含量。
試劑盒特點有:
1、高效、靈敏、特異的抗體;
2、穩定的重復性和可靠性;
3、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;
4、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養上清液、尿液等等多種標本類型;
5、節省實驗經費。
血清elisa試劑盒的操作流程如下:
1、血清總補體ELISA試劑盒待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
2、酶標板置4℃,包被過夜。
3、洗板:吸干孔內反應液,產品僅用于科研用洗滌液過洗一遍,之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
4、陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
5、酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。
6、洗板,同(4)。
7、每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
8、酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。
9、洗板,同(4)。
10、每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min。
11、每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。
12、分別測450nm吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
13、數據處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。